微流控阻抗流式細(xì)胞儀(IFC):單細(xì)胞檢測的得力助手
日期:2022-04-13 17:38:13

高通量 多參數(shù) 非標(biāo)記 無損檢測!




●實(shí)時監(jiān)測細(xì)胞狀態(tài),包括細(xì)胞濃度、數(shù)量,活力,大?。娭睆剑?,追蹤細(xì)胞的分化衰老凋亡和癌變

●適于所有類型的單細(xì)胞(腫瘤細(xì)胞,白細(xì)胞、紅細(xì)胞等哺乳動物細(xì)胞、細(xì)菌、病原體、酵母、藻類、浮游生物、花粉、精子等)

●標(biāo)準(zhǔn)化測試:高通量(>1000cells/s),高重復(fù)性、高精確度

●用戶體驗(yàn)友好,操作簡單易上手


微流控阻抗流式細(xì)胞儀(IFC)通過整合微流控技術(shù)、電阻抗技術(shù)與流式細(xì)胞術(shù),能夠在微流體精確參考條件下,實(shí)現(xiàn)流動態(tài)單細(xì)胞的連續(xù)、無損阻抗檢測。與傳統(tǒng)的單細(xì)胞檢測方法相比,微流控阻抗細(xì)胞儀具有非標(biāo)記、多參數(shù)、低污染和檢測速度快等顯著優(yōu)勢,可大大減少時間消耗并降低成本,為細(xì)胞的種類鑒別與狀態(tài)檢測提供了強(qiáng)有力的工具。

 

—— 工作原理 ——


基于細(xì)胞膜的電特性(膜電容和膜電阻),當(dāng)不同大小和活性的細(xì)胞或顆粒隨懸浮液流經(jīng)廣頻(0-30 MHz)交流電場時將產(chǎn)生不同的電阻抗信號,經(jīng)解析獲得細(xì)胞的濃度、數(shù)量、活性及大小等信息。如下圖所示:A)細(xì)胞在不同頻率的交流電場中的檢測結(jié)果:低頻電場反映細(xì)胞的體積特性即電直徑,高頻電場反映細(xì)胞的介電特性即細(xì)胞活性;B) 微流控芯片;C)細(xì)胞電阻抗信號(藍(lán)色實(shí)部即電阻信號,綠色虛部即容性電抗信號),細(xì)胞膜完整性決定容性電抗的大小,故可通過虛部信號來區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞,最終以阻抗相位角-振幅散點(diǎn)圖反映出來。


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微流控阻抗流式細(xì)胞儀信號的采集和轉(zhuǎn)導(dǎo)


—— 高精確度 ——


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圖1 酵母活性的檢測結(jié)果顯示IFC法與PI熒光染色法無差異(y = 0.9572x + 2.2259  R2 = 0.9957)

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圖2 BL2細(xì)胞濃度的測量結(jié)果顯示IFC與Neubauer血球計(jì)數(shù)板良好總方法之間的技術(shù)無差異(y    = 4E+0.6x-0.829, R2 = 0.9967)

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圖3 U937人淋巴瘤細(xì)胞活性對不同納米材料的劑量響應(yīng)曲線表明IFC法與TB染色法的結(jié)果一致 

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圖4 感染桿狀病毒(BV)后的Sf9昆蟲細(xì)胞大小變化表明IFC法與Countess?自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的分析結(jié)果無差異(R2=0.901)

 

—— 典型應(yīng)用 ——


●細(xì)胞大小和形態(tài)研究

●細(xì)胞活力測定

●毒理學(xué)研究

●細(xì)胞分化

●細(xì)胞凋亡

●在線細(xì)胞監(jiān)測


—— 案例分享(部分)——


◆分析腫瘤細(xì)胞活力及凋亡進(jìn)程


腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)是研究癌變機(jī)理、抗癌藥檢測、癌分子生物學(xué)極其重要的手段。腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)對闡明和解決癌癥將起著不可估量的作用。微流控阻抗流式細(xì)胞儀可高通量(>1,000個Cells/s)、非標(biāo)記測量每個細(xì)胞的生理特性,通過阻抗數(shù)據(jù)(相位-振幅散點(diǎn)圖)快速識別和量化腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)物的活性和濃度,評估腫瘤細(xì)胞對凋亡誘導(dǎo)劑、細(xì)胞毒劑的劑量反應(yīng)或分化、凋亡進(jìn)程。


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不同培養(yǎng)時期BL2細(xì)胞的阻抗相位和細(xì)胞活力的變化

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Staurosporine誘導(dǎo)下BL2細(xì)胞的凋亡過程


評估釀酒酵母活性


啤酒釀造過程中酵母菌種、酵母接種量、酵母使用代數(shù)、發(fā)酵工藝條件等都會影響啤酒的風(fēng)味。微流控阻抗流式細(xì)胞儀高通量、快速可靠測定細(xì)胞活力,細(xì)胞大小的變化,評估溫度、滲透壓以及對產(chǎn)物、底物等培養(yǎng)條件對酵母菌的影響,進(jìn)而優(yōu)化發(fā)酵工藝。


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啤酒釀造過程中釀酒酵母密度、活性及酒精濃度的變化


感染桿狀病毒(BV)后的Sf9昆蟲細(xì)胞的活性變化


基于昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)自身的特點(diǎn)和優(yōu)勢,目前已被廣泛應(yīng)用于藥物研發(fā)、疫苗生產(chǎn)、重組病毒殺蟲劑等眾多領(lǐng)域。微流控阻抗流式細(xì)胞儀可幫助在昆蟲細(xì)胞BV感染過程中檢測細(xì)胞活力變化、確定多重性感染(MOI)范圍、篩選理想的表達(dá)條件并預(yù)測BV昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)中收獲胞內(nèi)蛋白的理想時間。如案例所示,Sf9昆蟲細(xì)胞在感染桿狀病毒后的數(shù)小時(hpi)內(nèi),微流控阻抗流式細(xì)胞儀所獲得的相位-振幅散點(diǎn)圖可明顯分離出三個細(xì)胞類群,分別是活細(xì)胞(viable)、感染晚期(LPI)和死細(xì)胞(dead)類群。感染48hpi后,活細(xì)胞的阻抗振幅降低(細(xì)胞萎縮)且數(shù)量逐漸減少,直至99hpi細(xì)胞全部死亡。感染晚期(LPI)細(xì)胞類群出現(xiàn)在較低相位,這部分細(xì)胞在0-60hpi逐漸增加隨后減少直至消失。


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感染桿狀病毒(BV)數(shù)小時內(nèi)Sf9昆蟲細(xì)胞活性的變化


評估胰腺腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性


腫瘤患者來源的異種移植(PDX)是進(jìn)行化療藥物敏感性和毒性評估的有效手段,對預(yù)測化療療效十分重要。在藥物處理下分泌到培養(yǎng)基中的亞細(xì)胞凋亡小體(ABs)和微泡(MVs),可作為藥物敏感性的標(biāo)志物。然而由于ABs復(fù)雜多樣,很難確定每種AB型的適配熒光染料并預(yù)估ABs對不同染料滲透動力學(xué)的依賴性,因此利用流式細(xì)胞儀量化細(xì)胞分解過程存在極大的挑戰(zhàn)。微流控阻抗流式細(xì)胞儀作為一種測量單細(xì)胞電生理學(xué)特性的有效工具,不僅免除了費(fèi)力耗力的細(xì)胞收集和染色標(biāo)記過程,還可避免因染色不當(dāng)所造成的細(xì)胞凋亡,可在不同的腫瘤微環(huán)境模型和藥物類型下高通量、非標(biāo)記、快速無損檢測ABs表型并追蹤細(xì)胞凋亡過程,進(jìn)而準(zhǔn)確評估藥物敏感性和毒性。


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不同濃度的吉西他濱誘導(dǎo)下PDAC細(xì)胞系的凋亡變化(顯微鏡鏡檢vs.流式細(xì)胞術(shù)vs. IFC法)


評估納米材料毒性


納米材料廣泛應(yīng)用于工業(yè)、農(nóng)業(yè)、食品、日用品、醫(yī)藥等各個領(lǐng)域的同時,已不可避免地給我們的環(huán)境和健康帶來不利影響。因此,為確保納米材料的安全性,促進(jìn)納米技術(shù)的發(fā)展,進(jìn)行納米材料毒性評估十分必要且緊迫。微流控阻抗流式細(xì)胞儀可以非標(biāo)記、高通量、快速評估納米材料的毒性,避免假陰性或假陽性的檢測結(jié)果,是一種可靠且經(jīng)濟(jì)高效的檢測方法。


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U937細(xì)胞對NM-300K(Ag,100μg/ mL)的急性毒性效應(yīng)


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