光曲線（光響應曲線）由一系列不同強度的照光步驟組成，通常光強是逐漸遞增的。在每個照光步驟結束時，執(zhí)行飽和脈沖分析。滯后光曲線(Hysteresis light curves，HLC)與傳統(tǒng)光曲線的區(qū)別在于它除了遞增的光強梯度系列外增加了遞減的光強梯度序列。通過對滯后光曲線光強遞增和遞減相的比較，可以量化由照射高光引起的滯后效應，其大小和方向可以說明高光誘導的光合作用過程的激活以及隨后的恢復。對于絕大部分PAM而言，滯后光曲線的測量非常簡單，在Light Curve窗口點擊Edit編輯一個先遞增后遞減的照光序列，然后點擊Start即可開始測量。下面我們以雙通道葉綠素熒光儀DUAL-PAM-100單通道測量Fluo為例，用圖文結合的方式將滯后光曲線的實驗流程分享給大家。實驗時間：200s-10min，如果需要能適應，時間更長。
將葉片夾到激發(fā)和檢測單元中間，上表面朝向檢測單元。如果是測量藻類懸浮液，取1.4ml樣品，放到石英杯，然后將石英杯放到懸浮樣品架中間的樣品槽中，蓋上蓋子。打開Dual PAM的軟件，電腦會自動識別開放的端口，然后進入下面的初始界面。Analysis Mode分析模式選擇：SP AnalysisDetector Type檢測器類型根據(jù)所用設備的具體配置選擇：DB或DRFluo Gain增益選擇：5(High)；Damping阻尼選擇：1ms(High)打開左下角的F ML，觀察軟件界面右邊紅色的Fluo數(shù)值是否在0.2以上，0.6以下，如果不在該范圍，切換到Meas.Light設置界面調(diào)整Fluo Meas.Light的Int.，使Fluo的數(shù)值在0.2-0.6范圍內(nèi)。
切換到Slow kin.設置界面，調(diào)整采點數(shù)和采點率，設置一個時間，該時間要長于滯后光曲線所需的總時間。以完整的滯后光曲線20步為例，如果單個光梯度的時間是30秒，所需的時間是10分鐘（600秒），因此上圖中Acquisition的Time：1280s是足夠的。切換到Sat.Pulse設置界面，檢查飽和脈沖的強度和持續(xù)時間。默認設置Int.=6的強度高達10000 μmolm-2s-1，Width=300ms的持續(xù)時間足以飽和樣品，可滿足絕大部分實驗要求。
切換到Light Curve測量窗口，點擊軟件右邊的Edit，在彈出的對話框中編輯滯后光曲線的照光程序。第一列為Step（不可修改），完整的光曲線最多可以運行20步。第二列為PAR（無需修改），光合有效輻射強度（μmolm-2s-1）；第三列Intens.（Intensity，修改后第二列會隨之變化）為光化光的檔位，對應于強度檔位的PAR自動從當前設置的PAR列表中獲取。滯后光曲線的照光協(xié)議要求光強先升高，后降低，因此我們需要先設置一個遞增的變光梯度，然后再把梯度降下來，以完整的20個Steps為例，10個遞增，10遞減，對稱設置。此時可以跳檔設置（1，4，6，8，11，13，15，16，17，18，18，17，16，15，13，11，8，6，4，1）；第四列Time/10s（可以修改），是每一個梯度下光強照射的時間，單位是10s，設置3，即每個光強梯度照30s。一般選擇相同的時間，Time設為0，0被視為停止符。光曲線會在這一步自動停止。設置完后即可點擊OK退出Edit對話框。在Light Curve窗口點擊Start，啟動滯后光曲線的測量，軟件會自動執(zhí)行先前編輯好的照光協(xié)議。測量完成后，可以在Repot查看，保存或導出滯后光曲線的數(shù)據(jù)。上述實驗流程為最基本的操作步驟，如果您有更多細節(jié)問題需要咨詢可以聯(lián)系熟悉的技術工程師。更多PAM的使用技巧及參考文獻可以聯(lián)系我們，我們將竭誠為您提供滿意的服務。
